通常情況下，肺部支原體化驗，若單次抗體效價大于1:160，即可診斷為支原體肺炎。恢復期與初期相比抗體效價呈四倍以上增長，亦可診斷為支原體肺炎。由于兒童免疫力發育尚不完全，從支原體感染到抗體產生這段時間有時不能產生免疫反應，即不能產生IgM，因此此時檢測IgM呈略陽性或下降，甚至無法測出，應根據患者體質、起病時間、臨床癥狀進行綜合判斷，或使用其他檢測方法進一步確認。肺部支原體化驗，醫院使用較多的是明膠顆粒凝集，也有發光法和酶聯免疫法，目前的金標方法是培養法和核酸法。