在臨床上，ABO溶血病的確診需要通過實驗室的檢查結果來支持，其中包括血型檢查、血清膽紅素、血色素或者紅細胞壓積、溶血三項試驗等。對于既往有不良生產史，或者前一胎有新生兒重度黃疸史的孕產婦，都要與丈夫一起做ABO血型和Rh血型檢查，如果有血型不合，應當檢測孕婦血清中的IgG抗A和抗B抗體。如果抗A或者抗B抗體的滴度＞1:64，提示有發生新生兒ABO溶血的可能。如果有母子血型不合，新生兒出生后需要及時監測膽紅素，如果新生兒黃疸出現比較早，并且進行性加重，同時血紅蛋白或者紅細胞壓積快速下降，Coombs試驗和抗體釋放試驗其中一項陽性就可以診斷為ABO溶血病。