針對嬰兒佝僂病，醫生會根據病史、小兒的癥狀和體征，結合輔助檢查做出診斷。輔助檢查通常包括血鈣、血磷、堿性磷酸酶，以及血清25-羥基-D3。此外還有影像學的改變，如骨骼X線改變。血液生化檢查主要為血清25-羥基-D3進行性降低，其它生化指標改變可分為三期： 1、第一期：血清鈣降低，可伴有低鈣癥狀，如手足搐搦、抽風等，多無明顯的佝僂病體征，常見于6個月以下的嬰兒，較大患兒較少見； 2、第二期：甲狀旁腺激素代償性升高，使1，25-二羥基-D3產生增加，導致血鈣恢復正常，血磷降低，成骨細胞活躍，血清的堿性磷酸酶升高，如患兒蛋白質或鋅缺乏嚴重，堿性磷酸酶可不升高，尿磷以及尿環一磷酰腺苷增多，氨基酸尿、尿鈣減少，進而出現佝僂病的體征及骨骼改變； 3、第三期：血清甲狀旁腺激素及堿性磷酸酶進一步升高，血磷降低。因為維生素D的儲備耗竭而出現失代償，最終血清的1，25-二羥基-D3及鈣也降低，佝僂病的體征和骨骼改變更加重。 同時X線片也能顯示出佝僂病的表現。佝僂病早期無癥狀及體征改變，骨X線片正常。當維生素D嚴重缺乏，骨骼改變后X片上才會有顯示。嬰兒早期以腕骨改變最為明顯，是由于其早期恥骨橈骨遠端干骺端生長板肥大，軟骨細胞堆積，骺板邊緣的骨皮向外膨隆突出所導致，是佝僂病唯一的早期診斷指征。急性期時，由于尺橈骨遠端干骺端膨大，進而出現毛刷樣征，骺線增寬、皮質變薄、松質骨骨小梁數量減少。