OT試驗是指用舊結核菌素原液，以生理鹽水稀釋成1:100、1:1000和1:10000三種不同濃度的溶液，分別裝于密閉消毒的瓶內，保存于冰箱中備用。具體的稀釋方法為取舊結核菌素0.1ml，加生理鹽水至10ml，就是1:100的稀釋液。取1:100的稀釋液0.1ml，加生理鹽水至1ml，就是1:1000的稀釋液。取1:1000的稀釋液0.1ml，加生理鹽水至1ml，就是1:10000的稀釋液。OT試驗通常第一次需使用1:10000的稀釋液，以防止發生嚴重的皮膚和全身反應。常規消毒后應將皮試液注射于前臂屈側的皮內，48-72小時觀察結果，如果48小時結果不清，就應以72小時的結果為準。觀察結果時需注意局部有無硬結，而不能單獨以紅暈作為標準。陽性則代表受過結核桿菌的感染，陽性程度與發病與否并不完全對等，因為受到很多因素的影響。反應越強對結核病的診斷的意義越大，尤其對于嬰幼兒，但是不能單憑此就診斷活動性結核，還需結合胸部CT、血常規、血沉等其他生化指標，以及患者癥狀、體征進行綜合判斷。