腰椎穿刺定位，通常選擇第4/5腰椎或者第3/4腰椎的椎間隙。因為脊髓圓錐位置基本是在第12胸椎和第1胸椎的位置，所以選擇在第4/5腰椎或者第3/4腰椎的位置進行穿刺比較安全。大部分正常人的髂嵴最高點，通常是和第4/5腰椎椎間隙相齊平，可以通過體表摸到髂嵴最高點進行連線，然后根據連線對準脊柱骨中間的凹陷位置，則是第4/5腰椎椎間隙的情況。垂直于體表進行穿刺，則是第4/5腰椎椎間隙的位置。如果對第4/5腰椎椎間隙穿刺比較困難，往上延一個階段，可以定位到第3/4腰椎的椎間隙。