乙肝五項檢查通常無需空腹，但有幾個特殊情況，如體格較胖，患有高脂血癥等患者建議空腹。因為進食完后血液中脂肪會升高，有時可能出現乳糜血，因乙肝五項檢查需分離血清。在此情況下有時會給分離造成困難，對醫師的判斷造成一些影響，故建議抽血檢查還是空腹較好。進行乙肝五項檢查時，很有可能還需同時檢測肝功能等其它指標，所以建議盡量空腹。乙肝五項檢查中還有HBV-DNA，這些指標雖無需嚴格控制空腹，但空腹檢查最佳。